ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ

ମାଇକ୍ରୋବାୟଲ୍ ହୋଷ୍ଟର ମେଟାବୋଲିଜିମ୍ ବୁ standing ିବା ପୁରା କୋଷ ଭିତ୍ତିକ ବାୟୋକାଟାଲାଇଟିକ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାର ବିକାଶ ଏବଂ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ପାଇଁ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଜରୁରୀ, ଯେହେତୁ ଏହା ଉତ୍ପାଦନ ଦକ୍ଷତାକୁ ସୂଚିତ କରେ |ରେଡକ୍ସ ବାୟୋକାଟାଲାଇସିସ୍ ପାଇଁ ଏହା ସତ୍ୟ ଅଟେ ଯେଉଁଠାରେ ହୋଷ୍ଟରେ କୋଫାକ୍ଟର / କୋସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ପୁନ ener ନିର୍ମାଣ କ୍ଷମତା ଏଣ୍ଡୋଜେନସ୍ ହେତୁ ମେଟାବୋଲିକ୍ ସକ୍ରିୟ କୋଷଗୁଡିକ ନିୟୋଜିତ ହୋଇଥାଏ |ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଏଚେରିଚିଆ କୋଲି ପ୍ରୋଲାଇନ୍ -4-ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସିଲେସ୍ (P4H) କୁ ଅଧିକ ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା, ଏକ ଡାଇଅକ୍ସିଜେନେଜ୍ ମାଗଣା L- ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ର ହାଇଡ୍ରକ୍ସାଇଲେସନ୍ କୁ ଟ୍ରାନ୍ସ -4-ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସି-ଏଲ୍-ପ୍ରୋଲାଇନ୍ରେ ଏକ କେଟୋଗ୍ଲୁଟାରେଟ୍ (a-KG) ସହିତ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲା ​​|ଏହି ପୁରା ସେଲ୍ ବାୟୋକାଟାଲାଇଷ୍ଟରେ, କେନ୍ଦ୍ରୀୟ କାର୍ବନ ମେଟାବୋଲିଜିମ୍ ଆବଶ୍ୟକୀୟ କୋସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ a-KG ଯୋଗାଇଥାଏ, P4H ବାୟୋକାଟାଲାଇଟିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତାକୁ ସିଧାସଳଖ କାର୍ବନ ମେଟାବୋଲିଜିମ୍ ଏବଂ ମେଟାବୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ସହିତ ଯୋଡିଥାଏ |ଉଭୟ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଏବଂ ଗଣନାକାରୀ ଜୀବବିଜ୍ଞାନ ଉପକରଣ ପ୍ରୟୋଗ କରି ଯେପରିକି ମେଟାବୋଲିକ୍ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ ଏବଂ (13) ସି-ମେଟାବୋଲିକ୍ ଫ୍ଲକ୍ସ ଆନାଲିସିସ୍ ((13) C-MFA), ଆମେ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରି ପରିମାଣିକ ଭାବରେ ସମଗ୍ର କୋଷ ବାୟୋକାଟାଲାଇଷ୍ଟର ଶାରୀରିକ, ମେଟାବୋଲିକ୍ ଏବଂ ବାୟୋରେଜେଟିକ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟାକୁ ବର୍ଣ୍ଣନା କରିଥିଲୁ | ଟାର୍ଗେଟେଡ୍ ବାୟୋକନ୍ଭର୍ସନ୍ ଏବଂ ପରବର୍ତ୍ତୀ ଯୁକ୍ତିଯୁକ୍ତ ପଥ ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ ପାଇଁ ସମ୍ଭାବ୍ୟ ମେଟାବୋଲିକ୍ ବଟଲିନେକ୍ ଚିହ୍ନଟ କରିଛି | ପୁଟା ଜିନ୍ ଏନକୋଡିଂ ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ଡିହାଇଡ୍ରୋଜେନେଜ୍ ବିଲୋପ କରି ଏକ ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ଅବକ୍ଷୟ-ଅଭାବୀ ଇ କୋଲି ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ନିର୍ମାଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଏହି ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ସହିତ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସେଲ୍ ବାୟୋଟ୍ରାନ୍ସଫର୍ମେସନ୍ କେବଳ ପରିମାଣିକ ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ହାଇଡ୍ରକ୍ସାଇଲେସନ୍ ନୁହେଁ ବରଂ ବନ୍ୟ ପ୍ରକାର ତୁଳନାରେ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଟ୍ରାନ୍ସ -4-ଏଲ୍-ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସିପ୍ରୋଲାଇନ୍ (ହାଇ) ଗଠନ ହାରକୁ ଦ୍ୱିଗୁଣିତ କରିପାରିଛି |ମ୍ୟୁଟାଣ୍ଟ ଷ୍ଟ୍ରେନର କେନ୍ଦ୍ରୀୟ ମେଟାବୋଲିଜିମ୍ ମାଧ୍ୟମରେ କାର୍ବନ ଫ୍ଲକ୍ସର ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ P4H କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ପାଇଁ ବର୍ଦ୍ଧିତ a-KG ଚାହିଦା a-KG ଉତ୍ପାଦନ ଫ୍ଲକ୍ସକୁ ବ enhance ାଇ ନାହିଁ, ଯାହା ଅଧ୍ୟୟନ କରାଯାଇଥିବା ଅବସ୍ଥାରେ ଏକ କଠୋର ନିୟନ୍ତ୍ରିତ TCA ଚକ୍ର କାର୍ଯ୍ୟକୁ ସୂଚାଇଥାଏ |ୱାଇଲ୍ଡ ଟାଇପ୍ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ରେ, P4H ସିନ୍ଥେସିସ୍ ଏବଂ କାଟାଲାଇସିସ୍ ବାୟୋମାସ୍ ଅମଳର ହ୍ରାସ ଘଟାଇଲା |କ Interest ତୁହଳର ବିଷୟ, ΔputA ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ଅତିରିକ୍ତ ଭାବରେ ସଂପୃକ୍ତ ATP ଏବଂ NADH କ୍ଷୟକୁ TCA କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପରିବର୍ତ୍ତେ ତୁଳନାତ୍ମକ କମ୍ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ଅପଟେକ୍ଟ ହାରରେ ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ ଶକ୍ତି ହ୍ରାସ କରି କ୍ଷତିପୂରଣ ଦେଲା | ରେକମ୍ବିନାଣ୍ଟ ଇ କୋଲି BL21 (DE3) (pLysS) ରେ ପୁଟା ନକ୍ଆଉଟ୍ ମିଳିଲା | ଉତ୍ପାଦନକାରୀ P4H କାଟାଲାଇସିସ୍ ପାଇଁ କେବଳ ଜ ot ବ ଟ୍ରାନ୍ସଫର୍ମେସନ୍ ଅମଳ ଦୃଷ୍ଟିରୁ ନୁହେଁ, ବାୟୋଟ୍ରାନ୍ସଫର୍ମେସନ୍ ଏବଂ ପ୍ରୋଲାଇନ୍ ଅପ୍ଟେକ୍ଟର ହାର ଏବଂ ଶକ୍ତି ଉତ୍ସ ଉପରେ ହାଇପ ଅମଳ ବିଷୟରେ ମଧ୍ୟ ପ୍ରତିଶୃତି ଦିଅନ୍ତୁ |ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ, ଏକ ପୁଟା ନକ୍ଆଉଟ୍ ଉପରେ, କୋସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ a-KG ମାଧ୍ୟମରେ ହାଇଡ୍ରୋକ୍ସିଲେସନ୍ ପାଇଁ TCA- ଚକ୍ରର ଯୋଡି ହେବା ଏକ ମୁଖ୍ୟ କାରଣ ହୋଇଯାଏ ଏବଂ a-KG- ନିର୍ଭରଶୀଳ ଜ ot ବ ଟ୍ରାନ୍ସଫର୍ମେସନର କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତାକୁ ଆହୁରି ଉନ୍ନତ କରିବାକୁ ଏକ ଲକ୍ଷ୍ୟ ହୋଇଯାଏ |